A、线粒体需要用健那绿染色，健那绿是专一性染线粒体的活细胞染料，所以观察线粒体时，需要保持细胞活性，A错误；B、观察细胞有丝分裂实验中，需要对组织进行解离，而解离后细胞已经死亡，B正确；C、用于观察叶绿体的叶肉细胞为活细胞，C错误；D、用于进行质壁分离和复原实验的洋葱鳞片叶的紫色表皮细胞为红细胞，D错误．故选：B．
