比较最大激发波长和最大发射荧光波长的荧光强度意义不大。这是因为检测到的激发峰和发射峰只是从样品发出来的光的一小部分,并且检测到激发峰的原因是由于激发光在经过样品和空气时发生、折射、散射等因素才进入发射单色器被检测器检测到。
一般来说,比较荧光最大激发波长和荧光最大发射波长处荧光的强度从一些应用上可以说明该荧光物质的荧光效率,也就是这种荧光物质在最佳激发波长条件下可以发出荧光光子的多少。
某些物质受紫外光或见光照射激发能发射比激发光波较荧光物质
激发光谱荧光发射光谱用作该物质定性析激发光强度、波、所用溶
剂及温度等条件固定物质定浓度范围内其发射光强度与溶液该物质浓度
比关系用作定量析荧光析灵敏度般较紫外光光度或比色
高浓度太溶液自熄灭作用及由于液面附近溶液吸收激发光
使发射光强度降导致发射光强度与浓度比故荧光析应低浓度溶液
进行
所用仪器荧光计或荧光光光度计按各药品项规定选定激发光波
发射光波并配制照品溶液供试品溶液
由于易测定绝荧光强度故荧光析都定条件用照品溶液测定
荧光强度与浓度线性范围再每测定前用定浓度照品溶液校定仪器
灵敏度;相同条件别读取照品溶液及其试剂空白荧光读数与供试品
溶液及其试剂空白荧光读数用式计算供试品浓度:
R-R
C=×C
R-R
式 C供试品溶液浓度;
C照品溶液浓度;
R供试品溶液荧光读数;
R供试品溶液试剂空白荧光读数;
R照品溶液荧光读数;
R照品溶液试剂空白荧光读数
荧光析浓度与读数线性较窄故(R-R)/(R-R<[rb
]>)应0.50~2.0;超应调节溶液浓度再测
易光解品种使仪器灵敏度定标准确避免激发光照射影响荧
光强度选择种激发光发射光波与近似光稳定物质配适浓度溶
光的波长越小,光子能量越大.
荧光是由激发光激发的.激发光的光子打到荧光物质上,经过一系列变化,激发出荧光.
从能量角度看,一定有:激发光光子的能量>荧光光子的能量,否则多余的能量从哪来?