我说个大概吧，荧光定量PCR引物设计 一般都是跨内含子（这样能去除DNA的干扰），另外TM值在50-55左右，长度20bp左右，PCR product size 一般为150bp左右，最好不要有交叠试的二聚体。其实你能保证跨内含子，一般都OK的。
