用考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质的含量时,应注意哪些问题?

2025-03-07 09:38:38

推荐回答（3个）

回答1：

蛋白质所测的OD值一定要位于标准曲线范围内，因为G-250的曲线随着蛋白浓度增高有些略微偏离线性，若蛋白质浓度太高，可适当稀释后再测。此外，用于标准样品的牛血清白蛋白组分V最好现配现用，已经配好的溶液即使是-20度保存一段时间后也会造成你的结果偏高。

回答2：

1．大量的去污剂如tritonx-100、sds等严重干扰测定。
2．蛋白质与考马斯亮蓝g-250结合的反应十分迅速，在2min左右反应达到平衡；其结合物在室温下1h内保持稳定。因此测定时，不可放置太长时间，否则将使测定结果偏低。

回答3：

1.由于此方法十分灵敏，因此，所用器皿必须清洗干净，取样必须准确，否则会造成很大的误差。
2.定容时蒸馏水要沿着管壁缓缓加入，以免产生大量气泡，造成定容不准确，实验也会出现误差。