（1）称取
接配方精确称取各种营养物质。
（2）制备
马铃薯等块茎、植物根去皮后切块洗净，加水1000毫升，文火煮沸30分钟后过滤取汁；玉米粉称重后加水1000毫升，加热到70℃左右，保持60分钟，过滤取汁；麦芽称重后加水1000毫升，加热至60℃左右，保持60分钟，过滤取汁，最后补足水量至1000毫升。
（3）酸碱度调整
灵芝一般要求pH5.5～6，用稀碱1摩尔／升NaOH、稀酸1摩尔／升HCl来调整酸碱度至适度为止。
（4）分装、灭菌存放
将称好的琼脂，加入上述配好的液体培养基中，边加热边搅拌，待琼脂完全熔化后，用湿纱布迅速过滤，趁热进行分装。分装前要备好容器，分装试管时，要用玻璃漏斗进行分装，尽量避免培养基黏附管口，如培养基不慎黏着管口或管壁，要用纱布擦净，以免培养基粘住棉塞而引起污染。试管装量视需要而定，斜面培养基，装量为试管长度的1/5或1/4；深层培养基，一般为试管长度的1/2或2/3。培养基分装好后均要加上棉塞。棉塞用普通棉花制作，不宜使用脱脂棉。棉塞的大小，松紧要与试管口的口径相称，塞入试管的棉塞要紧贴管壁，不留缝隙，松紧度以提起棉塞而试管不脱落，拔出棉塞有轻微的声音为适宜。标准的棉塞应是塞头略大，不易变形，入管的部分占塞总长的2/3，外露1/3为宜；然后把2～3只试管捆扎在一起，棉塞外包扎牛皮纸或旧报纸。再用油纸包扎，装入高压灭菌锅灭菌，装锅时试管均要竖放，切勿倾斜或平置。蒸汽压力1.2千克/厘米2，温度达121℃，保持30分钟。灭菌后，让其压力和温度自然下降之后，取出培养基按要求摆成斜面，斜面的长度以不超过试管的1/2为宜，培养基冷却凝固，即成斜面培养基。放在25～28℃条件下，空白培养1～2天，检查无污染，才能使用。
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