做MTT实验 细胞铺板总是不均匀 有何良方解决

2025-04-04 09:51:52
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回答1:

做MTT实验 细胞铺板总是不均匀 有何良方解决
主要是基于SDH的活性,某些细菌有近似的代谢特性可能会干扰结果,

MTT实验:
将细胞以1×105/ml浓度接种于96孔培养板,100μl/孔,设8孔重复,孵育过夜;细胞贴壁后,用无血清培养液孵育24h,使细胞同步;弃上清液,以培养液配制不同浓度的药物100μl/孔,孵育24h,加入MTT液50μl/孔,继续孵育4h,倒置相差显微镜下观察,可见蓝紫色针状结晶;吸去上清,加入DMSO100μl/孔,室温振荡15min,待结晶完全溶解,酶标仪550nm波长检测吸光度值。

注 MTT可透过细胞膜进入细胞内,活细胞线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性MTT还原为难溶于水的蓝紫色的结晶并沉积在细胞中,结晶物能被二甲基亚砜(DMSO)溶解,用酶联免疫检测仪测定其光吸收值,可间接反映细胞数量。