pcr到底要不要加镁离子，纠结

PCR反应需要加镁离子，并且镁离子浓度的总量应该比dNTPs的浓度高，常用1.5mmol/L。

镁离子是加在PCR反应的缓冲液中的，成分是最复杂的，除水外一般包括四个有效成分：

1、缓冲体系，一般使用HEPES或MOPS缓冲体系；

2、一价阳离子，一般采用钾离子，但在特殊情况下也可使用铵根离子；

3、二价阳离子，即镁离子，根据反应体系确定，除特殊情况外不需调整；

4、辅助成分，常见的有DMSO、甘油等，主要用来保持酶的活性和帮助DNA解除缠绕结构。

缓冲液的目的是提供合适的酸碱度与某些离子，而PCR反应五要素是：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。

扩展资料：

标准的PCR过程：

1、DNA变性

在90℃-96℃下，双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA；

2、退火

在60℃-65℃下，系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链；

3、延伸

在70℃-75℃下，在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸，合成与模板互补的DNA链。

每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量即增加一倍。现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。

参考资料：百度百科-聚合酶链式反应

PCR的五大要素里其中一个就是镁离子,
一般来说，mg离子会对Taq酶有激活作用，会促进dna的合成，因为合成DNA的时候，核苷酸进入聚合酶的活性中心也需要镁离子来消除dna骨架上磷酸基团的负电荷，所以完全没有mg离子是不太可能扩增好pcr的。一般来说，提高mg离子的浓度会增加pcr扩增的效率。但是，Mg离子加多了之后，容易造成taq酶扩增的特异性降低，所以控制好mg离子的浓度对pcr来说还是很关键的。