首先,第一问,DNA连接酶对两端序列没有专一性要求。DNA被切开,暴露的单链部分的碱基会根据碱基互补配对原则在DNA连接酶的督促下又联合成双联,这样就连一起了。
图中目标基因的X端和载体质粒的M端都是被ECORI酶切割后暴露的单链部分。当目标DNA片段镶嵌到质粒中时,X端与M端就配对成双连,这样就形成了完整的新的又能被ECORI酶切割的一段序列。再加上质粒本身就有没有被破坏的PSTI酶可以切割的序列。所以重组质粒有两个可以切的地方:EcoRⅠ酶对应序列、PstⅠ酶对应序列。
用EcoRⅠ和PstⅠ酶切时,两种酶都有对应可以切的序列。所以重组质粒被切两刀!得到两种产物!采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切,只有EcoRⅠ酶可以切的地方,没有SmaⅠ酶可以切的地方,所以重组质粒只被EcoRⅠ切了一刀,得到一种产物!
hellolele00回答有偏差了,更正
第一问应该这样解释,DNA连接酶的作用时缝合限制酶切割的黏性末端,恢复磷酸二脂键,对所连接的DNA碱基序列没有专一要求。
第二问
由图一可看出质粒T上存在着EcoR1和Pst1的切割位点(分别是M和N),由此可以将该质粒切成两条不同的DNA片段,采用E1和S1酶切(只有M一个切点),得到一种DNA分子片段。
hellolele0已经回答的很好了。