加入95%的酒精,DNA不溶于酒精,DNA析出,可以去除溶于酒精的蛋白质
高浓度Nacl 溶液,用高盐浓度的溶液溶解DNA,能除去在高盐中不能溶解的杂质;用低盐浓度使DNA析出,能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此,通过反复溶解与析出DNA,就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。
题目答案应该是加入95%酒精,DNA不溶于酒清溶液,但是细胞中某些物质则可以溶于酒精溶液.利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
下边是整个实验的步骤和要点,供参考。
1.低渗搅拌破碎血细胞,释放DNA:将制备好的鸡血细胞液5 mL~10 mL,注入到50 mL烧杯中.向烧杯中加入蒸馏水20 mL,同时用玻璃棒充分搅拌5
min,使血细胞加速破裂.(注:蒸馏水对于鸡血细胞来说,是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞破裂,同时,再加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血细胞的破裂,即细胞膜和核膜的破裂,于是释放出DNA.)然后,用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500
mL的烧杯中,取其滤液.
2.高盐溶解DNA:将氯化钠的物质的量浓度为2 mol/L的溶液40 mL加入到滤液中,用玻棒沿一个方向搅拌1 min,使其混合均匀,这时DNA在溶液中呈溶解状态.
3.低盐DNA析出:沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水,同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌,这时烧杯中有丝状物(DNA)出现,注意观察丝状物呈什么颜色.继续加入蒸馏水,溶液中出现的粘稠物会越来越多.当加入的蒸馏水使氯化钠的浓度达到DNA的溶解度的最低点0.14 mol/L,粘稠物不再增加,这时停止加入蒸馏水,(注入蒸馏水约300 mL左右)
4.滤出DNA,DNA高盐再溶解,再过滤:用多层纱布过滤,使DNA的粘稠物留在纱布上,取一个50 mL的烧杯,向烧杯内注入物质的量为2 mol/L的氯化钠溶液20 mL,用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中,(注:如果粘稠物不容易取,可将有粘稠物的纱布面反过来浸在2
mol/L的氯化钠溶液中,用镊子轻轻地拔下粘稠物,使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中.)
5.冷却酒精漂洗,DNA析出:在上述滤过的溶液中,加入冷却的、酒精的体积分数为95%的溶液50 mL(使用冷却的酒精,对DNA的凝集效果较佳),并用玻棒搅拌,溶液中会出现含杂质较少的丝状物.用玻棒将丝状物卷起,(玻棒对DNA有吸附作用)并用滤纸吸取上面的水分.这种丝状物的主要成分就是DNA.注意观察丝状物是什么颜色的.
6.DNA显色鉴定:取两支20 mL的试管,各加入氯化钠的物质的量溶液为0.015 mol/L的溶液5
mL,将丝状物放入其中一支试管中,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解.(如果丝状物不溶解,可直接将缠有丝状物的玻棒放在试管中)然后,向两支试管中各加4 mL的二苯胺试剂.混合均匀后,将试管置于沸水中加热5 min,待试管冷却后,观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化.
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