中国药典微生物限度检查法的稀释液和培养基制备方法

2025-03-17 05:32:14
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回答1:

稀释液配制后,应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
1 .pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液
照无菌检查法(附录XII A)制备。
2.pH6.8无菌磷酸盐缓冲液、pH7.6无菌磷酸盐缓冲液
按缓冲液(二部附录XV D)配制后,过滤,分装,灭菌。
如需要,可在上述稀释液灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。
3.0.9%无菌氯化钠溶液
取氯化钠9.0g,加水溶解使成1000ml,过滤,分装,灭菌。 培养基可按以下处方制备,也可使用按该处方生产的符合要求的脱水培养基。配制后,应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
1.营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基及改良马丁琼脂培养基
照无菌检查法(附录XII A)制备。
2.玫瑰红钠琼脂培养基
胨 5.0g
玫瑰红钠 0.0133g
葡萄糖 10.0g
琼脂 14.0g
磷酸二氢钾 1.0g
水 1000ml
硫酸镁 0.5g
除葡萄糖、玫瑰红钠外,取上述成分,混合,微温溶解,滤过,加入葡萄糖、玫瑰红钠,分装.灭菌。
3.酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD )
胨 10.0g
琼脂 14.0g
酵母浸出粉 5.0g
水 1000ml
葡萄糖 20.0g
除葡萄糖外,取上述成分.混合,微温溶解,滤过,加人葡萄糖,分装.灭菌。
4.胆盐乳糖培养基(BL )  胨20.0g
磷酸二氢钾 1.3g
乳糖 5.0g
牛胆盐 2.0g
氯化钠 5.0g
(或去氧胆酸钠) ( 0.5g)
磷酸氢二钾 4.0g
水 1000ml
除乳糖、牛胆盐或去氧胆酸钠外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.4 ±0.2,煮沸,滤清,加人乳糖、牛胆盐或去氧胆酸钠,分装,灭菌。
5.乳糖胆盐发酵培养基
胨 20.0g
0.04%溴甲酚紫指示液 25ml
乳糖 10.0g
水 l000ml
牛胆盐 5.0g
除0.04%溴甲酚紫指示液外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.4 ±0.2,加人0.04%溴甲酚紫指示液,根据要求的用量分装于含倒管的试管中。灭菌。所用倒管的规格应保证产气结果的观察。
6.曙红亚甲蓝琼脂培养基(EMB )
营养琼脂培养基 100ml
曙红钠指示液 2ml
20%乳糖溶液 5ml
亚甲蓝指示液 1.3~1.6ml
取营养琼脂培养基,加热溶化后,冷至60℃,按无菌操作加入灭菌的其他3种溶液,摇匀,倾注平皿。
7.麦康凯琼脂培养基(MacC)  胨20.0g
1%中性红指示液 3ml
乳糖 10.0g
琼脂 14.0g
牛胆盐 5.0g
水 l000ml
氯化钠 5.0g
除乳糖、1%中性红指示液、牛胆盐及琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.2 ±0.2,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余各成分,摇匀,分装,灭菌,冷至约60℃,倾注平皿。
8.4 -甲基伞形酮葡糖昔酸(4-methylumbelliferyl-β-D-glucuionide,MUG)培养基
胨 10.0g
磷酸二氢钾(无水) 0.9g
硫酸锰 0.5mg
磷酸氢二钠(无水) 6.2g
硫酸锌 0.5mg
亚硫酸钠 40mg
硫酸镁 0.1g
去氧胆酸钠 1.0g
氯化钠 5.0g
MUG 75mg
氯化钙 50mg
水 l000ml
除MUG外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,加人MUG,溶解,每管分装5ml,灭菌。
9.三糖铁琼脂培养基(TSI )
胨 20.0g
牛肉浸出粉 5.0g
乳糖 10.0g
蔗糖 10.0g
葡萄糖 1.0g
氯化钠 5.0g
硫酸亚铁 0.2g
硫代硫酸钠 0.2g
0.2%酚磺酞指示液 12.5ml
琼脂 12.0g
水 1000ml
除三种糖、0.2%酚磺酞指示液、琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余各成分,摇匀,分装,灭菌,制成高底层(2~75px)短斜面。
10.四硫磺酸钠亮绿培养基(TTB)
胨 5.0g
硫代硫酸钠 30.0g
牛胆盐 1.0g
水 l000ml
碳酸钙 10.0g
取上述成分,混合,微温溶解,灭菌。
临用前,取上述培养基,每10ml加入碘试液0.2ml和亮绿试液0.lml,混匀。
11.沙门、志贺菌属琼脂培养基(SS)
胨 5.0g
硫代硫酸钠 8.5g
牛肉浸出粉 5.0g
中性红指示液 2.5ml
乳糖 10.0g
亮绿试液 0.33ml
牛胆盐 8.5g
琼脂 16.0g
枸橼酸钠 8.5g
水 1000ml
枸橼酸铁铵 1.0g
除乳糖、中性红指示液、琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.2±0.1,滤过,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余各成分,摇匀,灭菌,冷至60℃,倾注平皿。
12.胆盐硫乳琼脂培养基(DHL )
胨 20.0g
枸橼酸钠 1.0g
牛肉浸出粉 3.0g
枸橼酸铁铵 1.0g
乳糖 10.0g
中性红指示液 3ml
蔗糖 10.0g
琼脂 16.0g
去氧胆酸钠 1.0g
水 l000ml
硫代硫酸钠 2.3g
除糖、指示液及琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.2±0.1,加入琼脂,加热溶化后,再加人其余成分,摇匀,冷至60 ℃,倾注平皿。
13.溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基
胨 10.0g
溴化十六烷基三甲铵 0.3g
牛肉浸出粉 3.0g
琼脂 14.0g
氯化钠 5.0g
水 l000ml
除琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.5±0.1,加入琼脂,加热溶化后,分装,灭菌,冷至60 ℃,倾注平皿。
14.亚碲酸盐肉汤培养基
临用前,取灭菌的营养肉汤培养基,每100ml中加人新配制的1%亚谛酸钠(钾)试液0.2ml,混匀,即得。
15.卵黄氯化钠琼脂培养基
胨 6.0g
10%氯化钠卵黄液 100ml
牛肉浸出粉 1.8g
琼脂 14.0g
氯化钠 30.0g
水 650ml
除10 %氯化钠卵黄液外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.6土0 .1,灭菌,待冷至约60 ℃,以无菌操作加入10%氯化钠卵黄液,充分振摇,倾注平皿。
10%氯化钠卵黄液的制备取新鲜鸡蛋1个,以无菌操作取出卵黄,放入10%无菌氯化钠溶液100ml中,充分振摇,即得。
16.甘露醇氯化钠琼脂培养基
胨 10.0g
酚磺酞指示液 2.5ml
牛肉浸出粉 1.0g
琼脂 14.0g
甘露醇 10.0g
水 l000ml
氯化钠 75.0g
除甘露醇、酚磺酞指示液及琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节州值使灭菌后为7.4 ±0.2,加入琼脂,加热溶化后,滤过,分装,灭菌,冷至60 ℃,倾注平皿。
17.乳糖发酵培养基
胨 20.0g
乳糖 10.0g
0.04%溴甲酚紫指示液 25ml
水 l000ml
除0.04%溴甲酚紫指示液外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.2±0.2,加入指示液,分装于含倒管的小试管中,每管3ml.灭菌。
18.绿脓菌素(Pyocyanin)测定用培养基(PDP琼脂培养基)
胨 20.0g
甘油 l0ml
氯化镁(无水) 1.4g
琼脂 14.0g
硫酸钾(无水) 10.0g
水 1000ml
取胨、氯化镁、硫酸钾和水混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,加入甘油及琼脂,加热溶化,混匀,分装于试管,灭菌,置成斜面。
19.梭菌增菌培养基
牛肉浸出粉 10.0g
盐酸半胱氨酸 0.5g
胨 10.0g
氯化钠 5.0g
酵母浸出粉 3.0g
醋酸钠 3.0g
可溶性淀粉 1.0g
琼脂 0.5g
葡萄糖 5.0g
水 1000ml
取上述成分,混合,加热煮沸使溶解,调节pH值使灭菌后为6.8士0.2,加热溶化,滤过,分装,灭菌。
20.哥伦比亚琼脂培养基
酪蛋白胰酶消化物 10.0g
肉胃酶消化物 5.0g
心胰酶消化物 3.0g
酵母浸出粉 5.0g
玉米淀粉 1.0g
氯化钠 5.0g
琼脂 15.0g
水 1000ml
除琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.3士0.2,加入琼脂,加热溶化,滤过,分装,灭菌,冷至45~50 ℃,加人相当于20mg庆大霉素的无菌硫酸庆大霉素,混匀,倾注平皿。
21.沙氏葡萄糖液体培养基
胨 10g
葡萄糖 40g
水 1000ml
除葡萄糖外,取上述成分,混合,微温溶解,滤过。加人葡萄糖,溶解,分装,灭菌。
22.沙氏葡萄糖琼脂培养基
胨 10g
水 1000ml
葡萄糖 40g
琼脂 14g
除琼脂和葡萄糖外,混合,微温溶解,滤过。加入琼脂和葡萄糖,溶解,分装,灭菌。
23.(科玛嘉)念珠菌显色培养基(注1)
胨 10.2g
琼脂 15g
氢罂素 0.5g
灭菌水 1000ml
色素 22.0g
除琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值至6.3士0.2。滤过,加入琼脂,加热煮沸,不断搅拌至琼脂完全溶解,倾注平皿。
24.1%聚山梨酯80-玉米琼脂培养基
黄色玉米粉 40g
琼脂 10~15g
聚山梨酯80 10ml
水 1000ml
取玉米粉、聚山梨酯80及蒸馏水500ml,混合,65℃加热30分钟,混匀,用纱布滤过,补足原水量。取琼脂,水500ml,混合,加热溶解。将以上两种溶液混合,摇匀,分装,灭菌。

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