细胞同步化的M期同步化

(一)M期同步化方法
1．振荡收集法
该法利用M期细胞变圆易脱落的特点，将生长旺盛的贴壁细胞按一定的时间间隔振荡，使M期细胞脱落，逐步收集培养基，并补充新的培养基。收集的细胞放4~E冰箱中保存，离心沉淀后即获得M期细胞。
2．秋水仙胺阻抑法
(1)将细胞传代培养至指数生长期。
(2)加入秋水仙胺，使最终浓度为0．05—0．1μg/mL培养基，作用6—7 h。如使用秋水仙素，使用浓度应加大5～10倍。
(3)荡收集细胞，800 r/min离心5—10 min，弃上清，收集的沉淀细胞即为M期细胞。 加入一定量培养基将细胞接种到培养瓶中或直接进行离体实验。由于秋水仙素或秋水仙胺对细胞有一定毒性，用量较小或作用时间较短细胞活性尚可恢复，而用量过大或时间过长则细胞不能存活，因此使用时应严格控制其剂量和作用时间。
3．N2阻断法 此方法较秋水仙胺阻抑法好。
(1)将细胞传代培养至指数生长期。
(2)将培养瓶置于N20罐中通人适量CO2(约相当于罐中体积的5%)。
(3)关闭好N2罐，接上N2管子及压力表，缓缓向罐中充气一直到压力为80-90磅/英寸2为止。
(4)将N2装置放在37℃培养箱中10—16 h(通常过夜)。次日从培养箱中取出，然后缓缓将N2放出(最好放出窗外)。
(5)取出细胞在镜下观察同步化效果，用振荡法收集细胞于离心管中。
(6)800 r/min离心10 min收集细胞。