现在你到了基因序列的网站,最下面的那一大段就是外显子2到9的序列。一般设计RT-PCR引物需要跨外显子交界,这样可以提高特异性。
你可以先拷贝外显子2的序列(216..289)
atgga ggagccgcag tcagatccta gcgtcgagcc ccctctgagt caggaaacat tttcagacct atggaaact
然后再拷贝外显子3的序列(407..428)
actt cctgaaaaca acgttctg
把这两段接在一起
atgga ggagccgcag tcagatccta gcgtcgagcc ccctctgagt caggaaacat tttcagacct atggaaact actt cctgaaaaca acgttctg
然后到下面这个网页设计引物
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/
把刚才拼接得到的序列贴到最上面的方框中,然后点最下面的按钮。过一会就点“check”,会得到几组引物。结果的最上方是位置示意图。你确认一下你的reserve primer要跨在序列拼接的交接点上,就可以了。
这是我帮你做的结果
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/primertool.cgi?ctg_time=1397236878&job_key=AhnqL9wldQFKLE4gLw58XjQjTk8nPFNK&CheckStatus=Check