A、获取抗冻基因时，可设计相应DNA单链片段作为引物，利用PCR技术扩增目的基因，A正确；B、利用限制酶和DNA连接酶构建基因表达载体，B错误；C、将基因表达载体导入番茄细胞的方法有基因枪法、花粉管通道法、农杆菌转化法，这三种方法都不需用Ca2+处理细胞，C错误；D、运用DNA分子杂交技术检测抗冻基因是否导入番茄细胞中，但不能检测抗冻基因是否在番茄细胞中表达，D错误．故选：A．
