25°或37°均可，关键在于结果判断时的处理。明胶培养基熔点低，培养温度高了明胶自溶，温度低了有些细菌不生长，所为，一般可先在适合细菌生长的温度培养，细菌生长菌落后，把平板放入在冰箱冷藏室凝冻后再判定，明胶酶分解的明胶低温后仍为液体状，自溶的则重新凝固。
