色谱图 最主要的几个参数:保留时间 峰面积 分离度 拖尾因子 理论塔板数
前面两个(保留时间Rt,峰面积A)可以直接得到;
分离度(resolution):表示两个相邻色谱峰的分离程度。计算公式:R=2(Rt2-Rt1)/(W1+W2)
Rt1 Rt2 分别表示 峰1 峰2 的保留时间,W1 W2 分别表示 两峰的底峰宽,分离度R≥1.5 表示两峰完全分开。
拖尾因子:表示色谱峰的对称程度 T(拖尾因子)=W0.05h/2d1
W0.05h为5%峰高处的峰宽,d1为峰顶点至峰前沿之间的距离
《中国药典》规定峰高法定量时T应该在0.95-1.05之间,低于0.95为前延峰,高于1.05为拖尾峰。
理论塔板数(theoretical plate number),用于定量表示色谱柱的分离效率
理论塔板数=5.54*(Rt/W0.5)^2 Rt 为保留时间 W0.5为半峰宽
也可以表示为:N=16*(t/w )^2。其中,t是溶质从进样到最大洗脱峰出现的时间,w为该溶质的洗脱峰在基线处的宽度。
比如你做橙皮甙 用样品峰面积乘对照纯度和称样量除以对照峰面积再除以样品称样量=样品含量。
一般液相用外标法通用的公式是样品峰面积比上纯品峰面积比等于质量比,用到校准系数和用到的稀释体积。