单酶切要想防止自连，最好的办法是把载体酶切产物脱磷酸。脱了磷酸的载体就无法自连，它只能和目的片段连接。
如果不想脱磷，可以在连接反应体系中加大目的片段的数量，提高阳性克隆的比例，但这不能完全避免自连。
不过最好的办法还是做双酶切。单酶切连接实在麻烦。
这个你单酶切最好是要过夜，而且跑电泳尽量时间长一些，如果有一条带，就说明差不多完全切开了，如果害怕不安全，可以把这条带切胶回收纯化，用纯化后的连接，自连的可能性会小一些
内容全部来源于网络收集，如有侵权，请联系网站删除：QQ：24596024