我是做了两次实验才成功，第一次只得到一个峰，第二次得到了两个峰。
原因我总结有如下几点：
1）、每支管收集的溶液量不一致，误差较大，导致只有一个吸收峰。
2）、可能是流速过快，小分子物质来不及扩散，与大分子物质一起被洗脱出来；或者是流速过慢，层析时间过长，小分子物质追上了大分子物质一起被洗脱出来。
3）、也可能是未能及时去接被洗脱出来的物质，有些成分已流出，只接到了后面流出来的物质，则为一个峰。
4）、样品未洗脱完全就终止了反应，小分子物质还停留在层析柱内，所以只收集到一种物质，只得到了一个峰。
【希望能帮到广大查询此问题的朋友们，因为我是被做实验报告讨论题给逼出来的。^_^】
分子筛层析通常要加入大于150毫摩的Nacl来防止蛋白质聚集沉淀的，你的平衡液中有吗？可能聚集而沉淀在柱子上了。
你跑完一个柱体积了吗？两个蛋白质相对分子质量相差大吗？若是不大，若果你的柱子分辨率不高的话，可能都在一个峰里面了。
原因有2个吧：
层析柱的分辨率不够高
每只管收集的溶液量不一致，误差较大，导致只有一个吸收峰.
分离蛋白质 血红蛋白+高铁氰化钾 血红蛋白 高铁氰化钾
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