pH7.4时镍柱对His标签亲和力最强，但是为了保证蛋白不沉淀，pH应偏离等电点1左右。由于你的蛋白等电点在9.3，所以建议可以用7.4到8之间试一下。
会的 在较低pH的buffer条件下，镍柱上螯合的镍离子容易脱落，而His-tag蛋白是和金属离子结合的。 所以pH太低会影响到结合效率。
