A、转录以DNA的一条链为模板，A错误；B、均需要在解旋酶的作用下，将双链中的氢键断裂，B错误；C、DNA复制和转录的主要场所为细胞核，此外在细胞质中也可进行，C错误；D、在一个细胞周期中，DNA只复制一次，而转录可进行多次，D正确．故选：D．
