Km呈负值（即整条直线都向下移动），亦即所有测定的v值都偏大。
由v= ，故推断最有可能的原因是v2整体测量值偏小，v2偏小的可能原因是H2O2本身的分解;此外，滴定时读数不准确也会对本实验造成较大影响。
米氏常数的意义：
1 反映酶的种类：Km是一种酶的特征常数，只与酶的种类有关，与酶浓度、底物浓度无关。
2 米氏常数是酶促反应达到最大反应速度Vmax一半时的底物浓度。其数值大小反映了酶与底物之间的亲和力：Km值越大，亲和力越弱，反之Km值越小，亲和能力越强。
3 Km可用来判断酶（多功能酶）的最适底物：Km值最小的酶促反应对应底物就是该酶的最适底物。
3.米氏常数的求法：
该方法的缺点是难以确定最大反应速度Vmax。
该作图法应用最广。但在低浓度是v值误差较大，在[S]等差值实验时作图点较集中于纵轴。因此在设计底物浓度时，最好将1/[S]配成等差数列，这样可使点距较为平均，再配以最小二乘回归法，就可以得到较为准确的结果。
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