酚氯仿抽提DNA体系后出现的现象及成因,沉淀DNA时为什么要用无水乙醇

DNA 溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时,乙醇会夺DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混 合,其乙醇的最终含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇来替代懈水乙醇。

但是加95%的乙醇使总体积增 大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。

折中的做法初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙醇,最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA.一般在室温下放置15-30分钟即可。

扩展资料：

酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速离心后取上清，所得DNA大小为100-150kb。甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）

表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。

碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。

参考资料来源：百度百科-dna提取

酚氯仿抽提DNA后，会使溶液分层，上层为水相，含有DNA；中间为蛋白（有时看不到）；下层为有机相。
原因是酚氯仿可以使蛋白质变性，从而从溶液中析出，但是蛋白密度会小于酚氯仿，所以离心后它分布在中间；而DNA溶于水而不溶于有机相。

沉淀DNA用无水乙醇，是因为DNA不溶于乙醇，而乙醇可以夺取水，从而使得DNA聚集沉淀，如果用乙醇沉淀的话一定要用2倍以上的无水乙醇。 也可以用异丙醇沉淀。