骨源性碱性磷酸酶不等于碱性磷酸酶
骨源性碱性磷酸酶 是一种病叫佝偻病
小儿佝偻病是儿保防治的四病之一,是儿科常见、多发病,由于日照不足,北方高发,虽经多年防治,其患病率仍高达31.7%。厂商由于缺乏对钙营养问题的科学认识或出于商业目的,在媒体上大肆炒作,致使广大家长盲目给孩子补钙,而对维生素D的作用认识不足,因其过量应用易产生中毒症状,也出现了医生指导维生素D治疗的偏差,为避免中毒而出现用量不足,延误了治疗。是因为以往的检测指标不能及时、准确反映机体钙状态。
〔1〕 儿童期AKP主要以NBAP为主,约占AKP的51%,但AKP受其他组织器官疾病的影响较大,故认为NBAP更能准确反映骨代谢情况,NBAP作为儿童期骨代谢指标明显优于AKP
〔2〕 应用骨源性碱性磷酸酶(NBAP)这一反映骨代谢状况的较好生化指标,对门诊6个月~3岁儿童进行NBAP检测,同时测定血钙(Ca)、血磷(P)、碱性磷酸酶活性(AKP),对其敏感度、特异度、准确性进行评价,同时指导儿童科学补钙,观察疗效。
诊断 简易诊断:按1986年卫生部颁发的佝偻病简易诊断标准进行筛查,简易诊断依据病史、症状、体征为指标,其中体征为主要条件。诊断时结合年龄、季节、喂养、维生素D缺乏史及其他病史等进行综合分析决定。NBAP诊断标准 〔2〕 :0~7岁小儿NBAP≤200u/L为正常;201~250u/L为亚临床状态 〔3〕 ;>250u/L为诊断界限。
生化检查 采静脉血进行血钙(Ca)、血磷(P)、碱性磷酸酶活性(AKP),NBAP检测。血清钙、磷、AKP在7170A全自动生化分析仪上测定,各参数均按仪器进行设置;NBAP采用北京中生生物工程高科技公司提供的NBAP试剂盒;干化学免疫法,按北京中生协和医学科学技术开发公司研制的试剂盒说明书操作。
治疗 对于NBAP检测>200u/L者给予胆维丁乳15mg治疗,1个月、2个月及3个月后复查血钙(Ca)、血磷(P)、AKP及NBAP,NBAP仍高于200u/L者再给予胆维丁乳15mg治疗,评价疗效。
碱性磷酸酶属于同源二聚体蛋白
人体内情况
碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中,其中以肝脏为最多其次为肾脏,骨骼、肠、和胎盘等组织,。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团,从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。但它不是单一的酶,而是一组同功酶。目前已发现有 AKP1 、 AKP2 、 AKP3 、 AKP4 、 AKP5 与 AKP6 六种同功酶。其中第 1 、 2 、 6 种均来自肝脏,第 3 种来自骨细胞,第 4 种产生于胎盘及癌细胞,而第 5 种则来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。 血清中的ALP主要来自肝脏和骨骼。生长期儿童血清内的大多数来自成骨细胞和生长中的骨软骨细胞,少量来自肝。尿中的直接来自于肾小管细胞,并非来源于血液。
碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查。患这些疾病时,肝细胞过度制造ALP,经淋巴道和肝窦进入血液,同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍,反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。但由于骨组织中此酶亦很活跃。因此,孕妇、骨折愈合期、骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、肝硬变、白血病、甲状腺机能亢进时,血清碱性磷酸酶亦可升高,应加以鉴别。
研究应用
碱性磷酸酶也是目前免疫诊断试剂产品最常用的标记酶之一。与辣根过氧化物酶(HRP)相比,ALP用作标记酶的优点是,稳定性高、灵敏度高,缺点是成本高,标记困难。 在研究中最常用的ALP如下: ◇细菌碱性磷酸酶Bacterial alkaline phosphatase (BAP), 来源:Escherichia coli C4 ; ◇ Shrimp alkaline phosphatase (SAP), 来源:一种北极虾 (Pandalus borealis) ; ◇ 小牛肠碱性磷酸酶Calf Intestinal Alkaline Phosphatase (CIP); ◇ 胎盘碱性磷酸酶Placental alkaline phosphatase (PALP)和分泌性碱性磷酸酶the secreted alkaline phosphatase (SEAP),后者是前者的C末端短缺版——与PALP相比,SEAP没有PALP的C末端最后24个氨基酸(这24个氨基酸构成了与糖基化磷脂酰肌醇靶向锚定的区域) ALP主要应用于分子生物学和酶免分析中: ★分子生物学中主要用作核酸的去磷酸化。因为DNA通常会在5'端结合磷酸基团,用ALP去磷酸化能防止DNA分子5'端与3'端连接,从而在后续步骤准备好之前让DNA分子抑制处于线性化状态;同样,通过去磷酸化可用作放射标记示踪。通常用作这些目的用的最多的是Shrimp alkaline phosphatase (SAP),因为在反应完成之后它是最容易灭活的。 ★酶免分析中应用最多的是ELISA,以竞争法测小分子抗原为例,抗体先与固相载体结合,然后让待测样品与事先经ALP标记过的该抗原竞争地与抗体结合,洗去未反应的过量ALP-抗原,加入显色底物。则可以通过与按梯度浓度变化的标准品绘出的标准曲线对比从而知道待测样品中抗原的浓度。ELISA中用的比较多的是 辣根过氧化物酶(HRP),底物为OPD, 深桔黄色 ,检测波长492nm;TMB, 蓝绿色,检测波长450nm 碱性磷酸酶,底物为PNPP(对-消基苯磷酸酯), 黄色 ,检测波长405nm ★目前工业上一个普遍的应用是作为检验牛奶的巴斯的灭菌的标志:被巴斯德过高温灭菌的分子会被灭活,向其中和未巴斯灭菌的牛奶中加入ALP的底物,2分钟后未灭菌的样品应该显黄色,如果待测样品(指被巴斯灭菌过的牛奶)也能呈现相同颜色,则说明巴斯灭菌温度未过度。当然总有例外,因为有少数细菌会产生耐热的ALP。
[编辑本段]测定方法
有很多种,我国曾应用较广的为磷酸苯二钠比色法,但现在应用较多的是连续检测法。
正常范围(连续监测法)
女性,1-12岁小于500U/L;大于15岁,40-150U/L;
男性,1-12岁小于500U/L;12-15岁,小于750U/L;大于15岁,40-150U/L。 高值可能说明有单管阻塞现象;低值更多出现于儿童和孕妇身上。高值表明有可能发生了活性骨沉积(这个可能译的不准,请指正,原文为active bone deposition),因为ALP是成骨细胞活动(造骨)的副产物(例如在佩吉氏斯症[畸形性骨炎]的案例中)。 一般来说,低值要比高值少见。
临床意义
临床上测定ALP主要用于骨骼 、肝胆系统疾病的诊断和鉴别诊断,尤其是黄疸的鉴别诊断。对于不明原因的高ALP血清水平,可测定同工酶以协助明确其器官来源。 1.生理性增高:儿童在生理性的骨骼发育期,碱性磷酸酶活力可比正常人高1~2倍。处于生长期的青少年,以及孕妇和进食脂肪含量高的食物后均可以升高。 2.病理性升高: (1)骨骼疾病如佝偻病、软骨病、骨恶性肿瘤、恶性肿瘤骨转移等; (2)肝胆疾病如肝外胆道阻塞、肝癌、肝硬化、毛细胆管性肝炎等; (3)其他疾病如甲状旁腺机能亢进。 3.病理性降低:见于重症慢性肾炎、儿童甲状腺机能不全、贫血等。