实时定量PCR基本原理如何？

2025-03-13 03:42:59

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回答1：

实时PCR（real—time polymerase chain reaction）又称荧光定量PCR或TaqMan PCR，是美国PE公司（Perkin Elmer）于1995年研制出的一种新的核酸定量技术。该技术在常规PCR基础上运用荧光能量传递（fluorescence resonance energy transfer，FRET）技术，加入荧光标记探针，巧妙地把核算扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起，借助于荧光信号来检测PCR产物。一方面提高了灵敏度，另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据，建立实时扩增曲线，准确地确定CT值，从而根据CT值确定起始DNA的拷贝数，做到真正意义上的DNA定量。另外由于CT值是一个完全客观的参数，CT值越小，模版DNA的起始拷贝数越小。因此，利用CT值确定DNA拷贝数实时PCR方法比普通终点定量方法更加准确。