不会。进行PCR反应试验的时候,其各种物质的含量是以终浓度来表示,即你所加入物质的量除以整个反应物总体积,只要终浓度不变,试验结果是不会变的,也就是你产物的浓度时不会变的。只不过是你的PCR产物量减半了,如果你用来进行克隆的话就要注意够不够。
还有,你说的循环数,循环数没有一个固定的标准,是根据你的试验要定。一般32—37个循环足够,因为在PCR后期循环中,随着taq酶以及各种离子的减少,不足以提供PCR的量,从而影响反应。建议你在做你这个试验的时候,可以看看文献,看看别人所用的试验体系。从而确定你的PCR反应程序。
1,视PCR仪而定,老式的不用改程序,某些新PCR仪会根据体系调温度,这种情况下要在机器上改一下;
2,循环数不用改变;
3,产物浓度理论上不变;
PCR仪程序体系设定那里要改成25微升体系,循环数不变,最后得到的产物浓度原则上没有改变