FlashPfu DNA聚合酶有什么特点？

与其它在PCR反应中使用的聚合酶相比，Pfu聚合酶有着出色的热稳定性，以及特有的“校正作用”。与TaqDNA聚合酶不同，PfuDNA聚合酶具有3'-5'外切酶的即时校正活性，可以即时的识别并切除错配核苷酸。因此，使用PfuDNA聚合酶进行PCR反应，比使用Taq聚合酶有较低的错配突变几率，保真性更高。Pfu聚合酶正逐渐取代Taq聚合酶，成为使用最广的PCR工具。商业化的Pfu聚合酶试剂，其出错率是100万到130万个碱基对出现一个错配，使用PCR每扩增1kb的DNA片段会产生2.6%的突变产物。但缺点是，Pfu聚合酶的效率较低。一般来说，在72°C扩增1kb的DNA时，每个循环需要1到2分钟。而且使用Pfu聚合酶进行PCR反应，会产生钝性末端的PCR产物。Pfu聚合酶常常用于保真性要求较高的DNA合成中。有报道说，Pfu聚合酶与Taq聚合酶联合使用，既能达到Pfu聚合酶的高保真性，又能发挥Taq聚合酶的快速聚合活性。补充：此酶催化DNA合成的忠实性比Taq酶高12倍，最适延伸温度为72~78摄氏度，PfuDNA聚合酶耐热性极好，97.5摄氏度时的半衰期大于3小时。在无dNTP时，PfuDNA聚合酶会降解模板DNA，因此反应时一定要最后加入该酶到反应的混合物中。由于该酶加入低盐缓冲液。20mmol/LTris.HCl,pH8.2,10mmol/LKCl,6mmol/L硫酸铵1.5mmol/L氯化镁0.1%TritonX-100,10ng/ulBSA退火温度比Taq酶低，约在37~45摄氏度之间，加入1%~5%甘油，或者DMSO可以提高该酶催化的PCR产量。一般耐热DNA聚合酶扩增片段长度小于5kb，是PCR技术应用受到一定限制。Boehringer公司新近推出一种Expand长片段扩增系统，其扩增片段可长达40kb。

同科生物FlashPfu DNA聚合酶：
1、高保真PCR——保真性为Taq DNA聚合酶的50倍
2、快速PCR——延伸速度15−30 s/kb
3、长片段PCR——基因组DNA ≤ 19 kb，λ DNA ≤ 30kb
4、生成用于平头末端克隆的PCR产物