A、微生物培养中获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染，A正确；B、通常可以采用稀释涂布平板法或平板划线法进行单菌落的分离，以消除污染的杂菌，B正确；C、培养基通常可以进行高压蒸汽灭菌，但对于培养基中有高温易分解的成分，就不能用此方法，如培养基中的碳酸氢钠等物质，C错误；D、倒平板后需要将培养皿倒置，以防止培养基蒸发冷凝成的水滴入培养基而污染，D正确．故选：C．
