现在红细胞裂解液都是直接买现成的了,可以去北京索莱宝买。
以下是红细胞裂解液配方:(仅供参考)
1.裂解液:的确是ACK裂解液作用更柔和些
配方:
NH4CL 8.29g
KHCO3 1.00g
Na2EDTA 37.2mg
溶于1000mL蒸馏水, pH 7.2-7.4, 效果一直很好。
注意:
(1) 裂解液如果放在冰箱里,一定要预热,37度即可。裂解期间试管也可水浴,但如果是夏天室温比较高则不必;
(2) 裂解5min后立刻离心(从所有管都混匀后计时间);
(3) PBS离心洗涤2次;
(4) 裂解液pH值很重要,最好一次不要配多,时间长效果不好,我一般一次配100mL,
避光保存。
2.离心速度:800-1000rpm,5min
3.研磨轻柔很重要
4.培养淋巴细胞的最佳培养液是RPMI 1640,因为是原代细胞,要用10%胎牛血清。还有非常重要的一点,要想让细胞增殖得好,必须加二巯基乙醇(beta-2ME)
5.细胞密度1-2X10^6/mL
红细胞裂解液的制备:碳酸氢钾(KHCO3)1.0g;氯化氨(NH4CL)8.3g;EDTA-Na2 0.037g,加双蒸水至1000ml,即工作液。(该配方出自《实用流式细胞术彩色图谱》)