上游引物不能全覆盖miRNA，5‘-增加几个碱基后Tm值和下游引物相对应，可以再用软件检查，避免非特异性结合一般自己设计这种miRNA的RT-PCR引物需要不断优化，一次成功的机会较小，要做好心理准备。可以选择试剂盒
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