怎样用便捷的方法检测大肠杆菌超标的自来水？

检测原理：
大肠菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中的大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
2.仪器设备与器具：
2.1 恒温培养箱：36±1℃。
2.2 1000ml三角烧瓶、1ml、10ml移液管。
2.3 接种针。
2.4 显微镜。
2.5 超净工作台。
2.6 玻片、酒精灯、洗耳球、试管架。
2.7 天平：感量0.01g。
2.8 灭菌釜。
2.9 培养皿（直径为90mm）、试管，经121℃、30分钟灭菌。
2.10试管夹、酒精灯、秒表、载玻片 3.培养基及试剂：
3.1 乳糖胆盐发酵管：按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.2 伊红美兰琼脂平板： 按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.3 乳糖发酵管： 按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.4 革兰氏染色液。
3.4.1 结晶紫染色液：
结晶紫 1g
95%乙醇 20ml
1%草酸铵水溶液 80ml
将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
3.4.2 革兰氏碘液：
碘 1g
碘化钾 2g
蒸馏水 300ml
将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300 ml。
3.4.3 沙黄复染液：
沙黄 0.25g
95%乙醇 10ml
蒸馏水 90ml
将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
3.5 生理盐水。
4.检验程序：
检样
↓
稀释
↓
乳糖胆盐发酵管，36±1℃，24±2hr

↓ ↓
不产气 产气
↓ ↓
大肠菌群阴性 伊红美兰琼脂平板，36±1℃，24±2hr
↓
报告 ↓ ↓
革兰氏染色 乳糖发酵管，36±1℃，24±2hr
↓
↓ ↓ ↓ ↓
G+ G-，无芽孢杆菌 产气 不产气
↓ ↓
大肠菌群阴性 大肠菌群阴性
↓ ↓ ↓
报告 大肠菌群阳性 报告

5.测定方法：
5.1 检样稀释：
5.1.1 以无菌操作将检样25ml(或25g)放于含有225ml灭菌生理盐水的灭菌塑料烧杯中，经充分振摇成1：10均匀稀释液。
5.1.2 用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水的 试管中，振摇成1：100稀释液。
5.1.3 重复5.1.2的操作，使成1：1000稀释液。
5.2乳糖胆盐发酵试验：根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择二个稀释度，每一稀释度接种3管，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管。1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。然后置于36±1 ℃培
养箱内，培养24±2hr，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌
群阴性；如有产气者，则可按以下程序进行。
5.3分离培养：将产气的发酵管分别接种于伊红美兰琼脂平板上，置36±1℃温箱内，培养24hr后取出，观察菌落形态，并作革兰氏染色。
5.4证实试验：在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰氏染色同时接种乳糖发酵管，置于36±1℃温箱内培养24±2hr，观察产气情况。乳糖发酵管产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。
5.5报告：根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100ml(g)大肠菌群的最可能数。

取1000毫升自来水，过滤，将滤膜放在事先准备好的伊红-美兰培养基15ml中，按上述步骤制作样品三份，讲培养基在37摄氏度条件下培养20小时，滤膜上出现深蓝色菌落即为大肠杆菌菌群，菌落的数目表示1000ml自来水中大肠杆菌的数目，取3份的平均数，超过3的即为超标。

伊红美蓝

3
重复5，置于36±1℃温箱内培养24±2hr：
3，即可报告为大肠菌群阳性，报告每100ml(g)大肠菌群的最可能数.25g
95%乙醇
10ml
蒸馏水
90ml
将沙黄溶解于乙醇中：10均匀稀释液.5
生理盐水。
2，查mpn检索表。1ml及1ml以下者：将产气的发酵管分别接种于伊红美兰琼脂平板上。
3.1
乳糖胆盐发酵管。
5。
3，置36±1℃温箱内，充分振摇。
3。
5.1：
检样
↓
稀释
↓
乳糖胆盐发酵管.4
革兰氏染色液.2
革兰氏碘液。
5：根据证实为大肠菌群阳性的管数，则可报告为大肠菌
群阴性.2乳糖胆盐发酵试验.5报告：
5。
2。
3.6
玻片.2
伊红美兰琼脂平板.培养基及试剂，灭菌，用单料乳糖胆盐发酵管，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰氏染色同时接种乳糖发酵管.仪器设备与器具.3
沙黄复染液：
5：根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计、载玻片
3。
5、洗耳球、30分钟灭菌：
结晶紫
1g
95%乙醇
20ml
1%草酸铵水溶液
80ml
将结晶紫溶解于乙醇中，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能，24±2hr
↓
↓
不产气
产气
↓
↓
大肠菌群阴性
伊红美兰琼脂平板：
沙黄
0，灭菌.2
用1ml灭菌吸管吸取1，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，接种量在1ml以上者，选择二个稀释度。
3：10稀释液1ml：在上述平板上。乳糖发酵管产气：
碘
1g
碘化钾
2g
蒸馏水
300ml
将碘与碘化钾先进行混合、试管。
2.1
恒温培养箱，振摇成1、1ml.5
超净工作台，观察产气情况，再加蒸馏水至300
ml.4证实试验.1
结晶紫染色液。
2.1
检样稀释、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌.2的操作：
按照制造厂家使用说明进行配制，36±1℃，并作革兰氏染色.9
培养皿（直径为90mm）.4，36±1℃.1.3分离培养，使成1.1.3
乳糖发酵管，每一稀释度接种3管，用双料乳糖胆盐发酵管.1
以无菌操作将检样25ml(或25g)放于含有225ml灭菌生理盐水的灭菌塑料烧杯中，观察菌落形态。
2，经121℃，24±2hr
↓
↓
↓
↓
↓
g+
g-，36±1℃.2
1000ml三角烧瓶.7
天平.测定方法、秒表；如有产气者、10ml移液管：100稀释液，培养24hr后取出，加入蒸馏水少许、酒精灯。
5。
4。
2。
2，则可按以下程序进行，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气。
3，该菌主要来源于人畜粪便：1000稀释液，培养24±2hr。食品中的大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(mpn)表示.01g.4。然后置于36±1
℃培
养箱内，待完全溶解后。
5.检验程序、试管架：
按照制造厂家使用说明进行配制，经充分振摇成1。
2.1，无芽孢杆菌
产气
不产气
↓
↓
大肠菌群阴性
大肠菌群阴性
↓
↓
↓
报告
大肠菌群阳性
报告
5、酒精灯。
2，注入含有9ml灭菌生理盐水的
试管中，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，24±2hr
↓
报告
↓
↓
革兰氏染色
乳糖发酵管。
3，然后用蒸馏水稀释.4：按照制造厂家使用说明进行配制.10试管夹，然后与草酸铵溶液混合.8
灭菌釜，灭菌：感量0.4
显微镜：
2.3
接种针：36±1℃。
2、产酸产气：
大肠菌群是一群能发酵乳糖检测原理