PCR的模板或引物比较复杂时,各种怪事都会有。如果你的实验体系没问题,你可以试试先以较高退火温度p上5个循环,再以你筛的温度p上30个循环。或者把你的目的条带切胶回收,稀释后作模板再p。
有过,条件一样,出的东西不一样,可以试试换换taq酶、dntp、引物等,有可能某些东西失活了。
可能引物出了问题,使用新引物吧。