神经生长因子能用western blot检测么

究外源性神经生长因子（NGF）对QBC939细胞67-kDa层黏连蛋白受体（67LR）表达的影响,探讨胆管癌神经浸润的机制.方法 （1）细胞免疫荧光染色法检测QBC939细胞表面NGF高亲和力酪氨酸激酶受体A（TrkA）表达情况.（2）用不同浓度的重组人神经生长因子（β-NGF）对QBC939细胞进行处理,采用Real-Time PCR和Western blot检测QBC393细胞67LR mRNA和蛋白表达情况.实验分为对照组、β-NGF（1、10、100、200μg/L）组.（3）根据上述实验结果选定最佳β-NGF浓度,再加入不同浓度的TrkA阻断剂K252a,再次检测QBC939细胞67LR mRNA和蛋白表达情况.实验分为对照组、100μg/Lβ-NGF组、K252a（100、200、300 nmol/L）阻断组.数据采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法.结果 （1）QBC939细胞膜上TrkA表达明显.（2）对照组和β-NGF（1、10、100、200 μg/L）组QBC939细胞67LRmRNA和蛋白表达水平分别为0.35±0.06、0.38±0.14、0.62±0.14、0.90±0.08、0.70±0.10和0.32±0.05、0.50±0.09、0.69±0.13、0.93±0.07、0.76±0.07,两者比较,差异有统计学意义（F=22.4,14.6,P＜0.05）,其中100ng/ml β-NGF作用最明显（t=19.0,21.0,P＜0.05）.（3）对照组、100 μg/L β-NGF组、K252a（100、200、300 nmol/L）阻断组QBC939细胞67LR mRNA和蛋白表达水平分别为0.35±0.10、0.88±0.14、0.80±0.08、0.67±0.12、0.43±0.07和0.41±0.10、0.84±0.10、0.76±0.04、0.61±0.09、0.50±0.12,两者比较,差异有统计学意义（F=14.1,8.9,P＜0.05）,其中经300 nmol/L K252a处理后,QBC939细胞67LR mRNA和蛋白表达水平与对照组比较,差异无统计学意义（t=1.02,0.85,P＞0.05）.结论 外源性NGF通过与其高亲和力受体TrkA结合,可增强QBC939细胞67LR表达,这可能是促进胆管癌细胞延外周神经纤维间隙浸润的机制之一.