一般是相对于双链DNA设计引物。你拿到序列后，选择正链序列作为模板（一般标记为 r ）。然后用 primer 或者DNAman 分析序列里面是否有你想用的限制性酶切位点，有则需换序列中不存在的酶切位点。确定了上下游的酶切位点酶切位点之后，就可以用Oligo 设计引物，当然，高手的话也可以直接写。一般引物包括： 连接成线原件（也就是一段和模板连互补配对的序列，便于特异性的识别PCR起始位点，经常去12-20个碱基就好）、限制性酶切位点、保护碱基（方便限制性内切酶发挥作用，一般加3个碱基）。引物的长度最好控制在20-30bp。设计的引物经Oligo 评估觉得可以的话，就OK了。一般的指标主要是 GC%、Tm、引物二聚体分析、引物发夹结构，等等。百度一下，主要的几个指标达标就行了。如需帮助，可Hi我...
那你就去找一段序列，在两边设计引物，在引物的5端挂上酶切位点序列，P完之后就能链接进去
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