该实验的关键因素是防止核糖核酸酶(RNase)的污染。
RNase不需要辅助因子,生物活性极其稳定,耐高温、耐碱、耐酸。RNA样品中只要存在少量的RNase就会引起RNA的降解,从而影响后续实验。
RNase存在广泛,内源性的存在各种组织和细胞内部,外源性的污染提取过程中的各类试剂、枪头、离心管、电泳槽等。所以,条带弱应该是防止RNase污染不到位所致。
至于半个多小时还没跑出4分之一,应该是电压不够的问题,或者是搭桥时留有空隙。
因为RNA很容易降解,所以要很快的跑完,但是不能有较高的温度
所以,电压要调低一点,防止RNA降解;胶浓度也要低一点,这样跑得快一些;
跑之前最好将电泳液换成新的,然后冷却
这样一来,电泳的条件基本上就符合了,至少跑出来的RNA不好,不是因为电泳的问题。其他问题再进行排除。