猫头鹰羽色多变，即使是同一种猫头鹰，不同个体之间也有色彩差异，所以靠羽毛形态判断性别是不可靠的。对于大多数猫头鹰而言，雌鸟大于雄鸟，羽毛光泽度较差；雄鸟体型相对瘦长，看起来眼睛比例更大，腿相对较长。最保险的做法是用手指探摸腹部两腿后方耻骨端的间距（俗称“蛋门”）：雌鸟因为要产蛋，耻骨端的间距较大，雄鸟耻骨端的间距较窄。蛋门的宽窄要做个体比较后才能找到规律。用同样的方法可以鉴别外观差别不大的其它鸟的性别。
