什么是核酸分子杂交

在肿瘤学研究中，为了检测待检基因或其表达产物的性质和数量，常需应用核酸分子杂交技术。核酸分子杂交技术一般可分成两种，一种是窄缝杂交，另一种是印迹转移杂交。窄缝杂交由于加样最准确性及特导性较差，现在已很少应用。印迹转移杂交也分成两种，一种是Southern blot杂交，用于检测DNA样品；另一种是Northern blot杂交，用于检测RNA样品。简单介绍一下这些技术的原理，注意事项及应用。
（1）Southern blot杂交 将一定量的DNA样品用适当的限制性内切酶切割成不同长度的DNA片段，然后在琼脂糖凝胶上进行电泳分离，如加样量相等，酶解适当，则在用溴化乙锭染色时，应显示长度及亮度均相等的DNA拖带。电泳后的凝胶须经碱变性处理，使DNA解离成单链，然后用毛细管虹吸法或电转移法，使凝胶上的单链DNA片段，按凝胶上相同的位置转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜，经适当洗涤、凉干后，在80℃烤箱中加温2小时，即可用于杂交。用于检测DNA的已知探针，一般由带有该片段的细菌质粒中制备。纯化的探针DNA一般用放射性同位素32P或生物素、地高辛配基等标记。杂交前探针必须加温至100℃变性处理。杂交后的膜在暗盒中进行放射自显影后，即在一定的位置显示同标记探针特异地结合的阳性DNA条带。Southern blot杂交法可检测癌基因的存在及其扩增，也可检测抑癌基因的杂合性丢失。

（2）Northern blot杂交 Northern blot杂交的原理与Southern blot杂交基本相同。所不同处在于，RNA远不如DNA稳定，很容易被RNA酶降解，而RNA酶不仅广泛存在，而且加热至100℃也不能使其灭活，所以在操作RNA时所用的一切器皿和溶液都必需经过严格的消除RNA酶的处理。另外，RNA的电泳必须在含甲醛或乙二醛的变性凝胶中进行。Northern blot杂交主要应用于检测癌基因或基他肿瘤相关基因的过度表达，也可检测抑癌基因的低表达或不表达。

指两个生物体内提取的DNA分子的杂交。具体的过程是：将DNA分子用解旋酶全部处理成单链，混在一起。来至不同生物的DNA分子单链之间可能形成杂合双链。可用以鉴别两生物的亲缘关系的远近。