A、观察植物细胞质壁分离和复原现象中，存在前后自身对照实验，A错误；B、叶绿体的双层膜结构属于亚显微结构，只能在电子显微镜下才能观察到，B错误；C、赤道板是细胞中央的一个面，是一个假设物，并不是客观存在的，显微镜下观察不到，C错误；D、用双缩脲试剂检测蛋白质不需要加热，D正确．故选：D．
