回答你第二部分的问题吧，因为我这么干过，如果连反了的话，很有可能出现的情况就是你进行pcr验证，酶切验证以及测序验证都检验不出任何问题，然后那这个载体进行表达的时候，就表达不出来了，所以在一开始就要非常注意方向问题
