阴性对照涂布的应该是没有转质粒的空菌吧? 我觉得可能有三个原因: 1,你的amp平板失活,可能是你加抗生素的时候培养基温度太高。如果这样,你的平板就相当于是无抗的。 2,无菌操作失误,带入了其他有抗性的杂菌。 3,你的空菌被转入质粒的菌污染了。或者你的菌本身有污染。 鉴定的方法很简单,重点是你的阴性对照菌。做个菌落pcr看有没有目的带,或者直接挑单菌落用amp培养基(要保证不失活)摇菌过夜看长不长。