A、无籽西瓜的培育，是培育出三倍体植株，使其发生连会紊乱，从而无法产生西瓜籽，无籽西瓜的培育原理是染色体畸变，A错误．
B、抗虫烟草运用转基因技术，是指将分离纯化或人工合成的DNA在体外与载体DNA结合，成为重组DNA，导入到宿主细胞中筛选出能表达重组DNA的活细胞并进行纯化．B正确
C、杂交育种利用了基因的多样性，原理：基因重组．方法：将多个品种性状经过选择培育的方法．C错误．
D、脱去病毒植株利用植物组织培养技术，原理：愈伤组织的培养条件：必须无菌操作；D错误．
故选：B
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