2 酶━比色法 (略)
3 酶━电极法
3.1 原理
葡萄糖氧化酶(GOD)在有氧条件下催化β─D─葡萄糖(葡萄糖水溶液状态)氧化,生成
D─葡萄糖酸─δ─内酯和过氧化氢。过氧化氢与过氧化氢型电极接触产生电流。该电流
值与β─D─葡萄糖的浓度呈线性比例,在酶电极葡萄糖分析仪上直接显示葡萄糖含量。
一、实验目的
了解碘量法测定葡萄糖含量的方法。
二、原理
碘与NaOH作用可生成次碘酸钠(NaIO),葡萄糖(C6H12O6)能定量地被次碘酸钠(NaIO)氧化成葡萄糖酸(C6H12O7)。在酸性条件下,未与葡萄糖作用的次碘酸钠可转变成碘(I2)析出,因此只要用Na2S2O3标准溶液滴定析出的I2,便可计算出C6H12O6的含量。其反应如下:
⒈ I2与NaOH作用:I2 2NaOH == NaIO NaI H2O
⒉ C6H12O6和NaIO定量作用:C6H12O6 NaIO == C6H12O7 NaI
⒊ 总反应式:I2 C6H12O6 2NaOH == C6H12O7 NaI H2O
⒋ C6H12O6作用完后,剩下未作用的NaIO在碱性条件下发生歧化反应:3NaIO == NaIO3 2NaI
⒌ 在酸性条件下:NaIO3 5NaI 6HCl == 3I2 6NaCl 3H2O
⒍ 析出过量的I2可用标准Na2S2O3溶液滴定:I2 2Na2S2O3 == Na2S4O6 2NaI
由以上反应可以看出一分子葡萄糖与一分子NaIO作用,而一分子I2产生一分子NaIO,也就是一分子葡萄糖与一分子I2相当。本法可作为葡萄糖注射液葡萄糖含量测定。
三、试剂
⒈ HCl 2mol/L。
⒉ NaOH溶液 0.2mol/L。
⒊ Na2S2O3标准溶液 0.05mol/L。称取3g Na2S2O3溶于250mL水,具体标定与配制方法同碘量法测铜。
⒋ I2溶液 0.05mol/L。称取3.2g I2于小烧杯中,加6g KI,先用约30mL水溶解,待I2完全溶解后,稀释至250mL,摇匀。贮于棕色瓶中,放置暗处。
⒌ 淀粉溶液 0.5% 配法同碘量法测铜。
⒍ KI(固体) 分析纯。
四、实验步骤
⒈ I2溶液的标定。移取25.00mL I2溶液于250mL锥形瓶中,加100mL蒸馏水稀释,用已标定好的Na2S2O3标准溶液滴定至草黄色,加入2mL淀粉溶液,继续滴定至蓝色刚好消失,即为终点。计算出I2溶液的浓度。
⒉ 葡萄糖含量测定。取5%葡萄糖注射液准确稀释100倍,摇匀后移取25.00mL于锥形瓶中,准确加入I2标准溶液25.00mL,慢慢滴加0.2mol/L NaOH,边加边摇,直至溶液呈淡黄色。加碱的速度不能过快,否则生成的NaIO来不及氧化C6H12O6,使测定结果偏低。将锥形瓶盖好小表皿放置10~15分钟,加2mol/L HCl 6mL使成酸性,立即用Na2S2O3溶液滴定,至溶液呈浅黄色时,加入淀粉指示剂3mL,继续滴至蓝色消失,即为终点。记下滴定读数。
五、计算
C6H12O6%(W/V) =
六、思考题
⒈ 配制I2溶液时为何要加入KI?为何要先用少量水溶解后再稀释至所需体积?
⒉ 碘量法主要误差有哪些?如何避免?
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