没有问题的。我这样做过，电泳没问题的话能够显出条带的，但整体亮度要弱些。如果一抗没问题的话建议下次可以加个阳性蛋白做对照，看看哪里出问题了 祝实验顺利！
原则上可以再次孵育二抗，没有影响，但是二抗一般孵育1-2小时就足够了，再次孵育可能也不太可能有改变，不知道你如何判断的一抗没有问题
